白介素1βELISA試劑盒:精準(zhǔn)檢測炎癥與免疫的關(guān)鍵工具
白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)是一種重要的促炎細(xì)胞因子,在免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)及多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。其異常表達(dá)與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣硬化、糖尿病以及多種癌癥密切相關(guān)。因此,精準(zhǔn)檢測IL-1β的濃度對于疾病機制研究和臨床診斷具有重要意義。ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)技術(shù)因其高特異性、高靈敏度和操作簡便,成為檢測IL-1β的主流方法。
檢測原理
白介素1βELISA試劑盒主要基于雙抗體夾心法。其檢測原理如下:
1.預(yù)包被與樣本捕獲:將特異性抗IL-1β單克隆抗體固定于酶標(biāo)板孔中,樣本中的IL-1β通過抗原-抗體反應(yīng)被捕獲。
2.檢測抗體結(jié)合:加入標(biāo)記有二抗,與被捕獲的IL-1β形成“抗體-抗原-二抗”復(fù)合物。
3.信號放大與顯色:加入鏈霉親和素(Streptavidin)-辣根過氧化物酶(HRP)復(fù)合物,隨后加入顯色底物TMB。在HRP的催化下,TMB發(fā)生氧化反應(yīng),生成藍(lán)色產(chǎn)物,加入終止液后變?yōu)辄S色。產(chǎn)物的吸光度(450nm)與樣本中IL-1β的濃度呈正比。
產(chǎn)品特點
-高靈敏度:優(yōu)化的抗體設(shè)計使得檢測下限可達(dá)極低水平,如人IL-1β檢測下限可達(dá)5.8 pg/mL。
-高特異性:通過抗體篩選和優(yōu)化,交叉反應(yīng)率極低,與IL-1α等類似物無明顯干擾。
-操作簡便:標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程和試劑配置,使得檢測過程簡單易行。
操作步驟
1.準(zhǔn)備工作:仔細(xì)閱讀試劑盒說明書,準(zhǔn)備好所有試劑和器材,包括酶標(biāo)儀、微量加樣器等。
2.樣本處理:根據(jù)要求對樣本進行稀釋或離心處理。
3.加樣:將處理后的樣本加入酶標(biāo)板孔中。
4.加酶標(biāo)抗體:加入標(biāo)記的二抗。
5.溫育:在規(guī)定溫度和時間下進行溫育。
6.洗滌:用洗滌液清洗反應(yīng)孔,去除未結(jié)合的抗體。
7.顯色:加入顯色液,產(chǎn)生顏色變化。
8.終止反應(yīng):加入終止液,停止反應(yīng)。
9.測定:用酶標(biāo)儀測定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算IL-1β濃度。
應(yīng)用場景
白介素1βELISA試劑盒廣泛應(yīng)用于以下領(lǐng)域:
-基礎(chǔ)研究:用于研究炎癥機制、細(xì)胞信號通路等,如解析TLR4/NF-κB通路在胰腺炎中的作用。
-臨床診斷:檢測患者血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IL-1β濃度,輔助診斷炎癥性疾病。
-藥物研發(fā):評估藥物對IL-1β表達(dá)的影響,助力抗炎藥物的研發(fā)。
注意事項
-樣本保存:樣本需妥善保存,避免反復(fù)凍融。血清樣本可保存于2-8℃不超過1周,-20℃不超過30天,-80℃可長期保存。
-操作規(guī)范:嚴(yán)格遵循試劑盒說明書操作,避免交叉污染。
-安全防護:操作過程中需佩戴防護裝備,避免接觸酸性終止液。
白介素1βELISA試劑盒憑借其高靈敏度、高特異性和簡便操作,已成為研究和臨床檢測IL-1β的工具。其在炎癥研究、疾病診斷和藥物開發(fā)中的廣泛應(yīng)用,為相關(guān)領(lǐng)域的研究和實踐提供了有力支持。
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